动物实验

On 06月 11日 2018 posted iin: 动物实验, by     浏览次数：8558 次

  1. 动物实验基本技术服务，如标记、注射、灌胃等

  2. 药理学、毒理学、药代动力学实验

  3. 抗肿瘤药物、肿瘤动物模型建立实验

  4. 多抗、单抗的制备实验

  5. 动物胚胎、精子冷冻、移植实验

  6. 转基因与基因敲除鼠制作实验

 

 

 


转基因小鼠定制

 

服务项目

1.转基因小鼠定制

服务内容

将DNA显微注射到小鼠受精卵原核内生产转基因小鼠

服务流程

1．课题商谈，安排实验时间，签订合同。

2．显微注射，获得小鼠后交课题组进行基因型鉴定。

3．根据鉴定结果进行结算或进一步实验协商。

提供材料

需要提供新鲜制备的线性化DNA片段，具体制备方法详见附件。另外需要提供DNA的详细信息及电泳图。

收费标准

每轮显微注射周期约为3个月，每个质粒DNA至少提供2只PCR鉴定阳性的小鼠，每次费用为20000元，同个质粒如需更多的阳性小鼠，可以半价再安排一轮显微注射。如果首轮注射（一般200受精卵/轮）没有获得阳性小鼠，将免费再注射100个受精卵，若还是没有获得阳性小鼠，将与课题组沟通协商，重新进行DNA改造及纯化。对于没有获得阳性小鼠的注射，课题组仍需按实际情况支付一定比例的胚胎及注射成本费。多个质粒注射可享更多优惠，具体费用另行商议。

联系人

贺颖 email: hey@xmu.edu.cn Tel: 0592-2185817

注意事项

 用于显微注射的 DNA 的纯度对于成功产生转基因小鼠是极其关键的。细菌内毒素或有机物的污染都可能显著降低转基因DNA的整合效率和/或显微注射后胚胎的存活率。 目前有许多方法可以制备高纯度的质粒DNA，为了保证显微注射服务的成功率，我们通常推荐以下方法制备用于显微注射的质粒 DNA。
推荐的质粒 DNA 制备方法：
用以下任意一种试剂盒制备质粒 DNA：NucleoBond PC20 Kit (Clontech: Cat# 740571); Qiagen EndoFree Plasmid Kit (Qiagen: Cat# 12362); 或 Qiagen Plasmid Maxi Kit (Qiagen: Cat# 12162)。
取 20 μg 质粒 DNA，通过限制性内切酶将目的片段从质粒载体上分离出来。用含有 0.1-0.2 μg/ml 溴化乙锭（EB）的 1xTAE 缓冲液配制 0.8%的琼脂糖凝胶对样品进行电泳（注意尽量缩短EB与DNA的结合时间，尽快做完DNA的回收）。用一块干净的刀片在长波紫外光下将片断切割出来（因短波紫外光可能会破坏 DNA 因此不推荐使用）。
按如下方法纯化 DNA 片段：
– 对于小于 10 Kb 的 DNA 片段，用 Qiagen Qiaquick Gel Extraction Kit (Cat# 28704) 纯化，并在最后一步用40 μl 质粒注射缓冲液洗脱 DNA。
– 对于 10-40 Kb 的 DNA 片段， 用 Qiagen QIAEX II Gel Extraction Kit (Cat# 20021)纯化， 并且在最后一步用40 μl 质粒注射缓冲液洗脱 DNA。
用分光光度计（如 NanoDrop）测量 DNA 浓度。
在琼脂糖凝胶上检验 100 ng DNA，并与已知浓度及大小的等份 DNA 标准品（例如 Gibco High DNA Mass Ladder: Cat# 10496-016）进行比较。4℃保存，一周内送至动物中心。
课题组需要向我们提供至少 50 μl 溶解在注射缓冲液中的 DNA，并且浓度不低于 100 ng/μl，同时需要附上DNA 的凝胶电泳图片。DNA 的运输可在室温下进行。
缓冲液配方：
质粒注射缓冲液含有：
– 7.5 mM Tris – 0.2 mM EDTA
40ml 质粒注射缓冲液的配制方法：
– 1 M Tris-HCL, pH 7.4（推荐 Sigma 产品：Cat# T2663）: 300 μl
– 0.5 M EDTA （推荐 Sigma 产品：Cat# E7889）: 16 μl
– 添加高品质的蒸馏水至 40 ml

 

 

基因敲除小鼠定制

服务项目

2.基因敲除小鼠定制

服务内容

将课题组提供的ES细胞注射入小鼠囊胚中获得嵌合体小鼠

服务流程

1．课题商谈，安排实验时间，签订合同。

2．显微注射，获得嵌合体小鼠。

3．嵌合体小鼠交配获得基因敲除小鼠，交由课题组进行基因型鉴定。

4．课题结算。

提供材料

每次注射前需提供新鲜制备的高品质ES细胞。另外需要提供该ES细胞基因改造的详细鉴定资料。

收费标准

每轮显微注射到产生嵌合体小鼠的周期约为3个月，每个ES克隆至少提供2只嵌合率50%以上的雄性小鼠，每次费用为60000元。我们将免费进行嵌合体小鼠的合笼交配直到获得敲除小鼠（这个周期一般为3-10个月，取决于ES细胞的生殖传递效率），交由课题组进行基因型鉴定。若首轮注射未获得嵌合体小鼠，或是嵌合体小鼠成年后交配两个月仍若未获得敲除小鼠，将免费再注射80个胚胎，若还是没有获得嵌合体小鼠或敲除小鼠，将与课题组沟通协商，重新进行ES细胞的培养。对于没有获得敲除小鼠的注射，课题组仍需按实际情况支付一定比例的胚胎及注射成本费。需要特别注意的是，ES细胞的状态极大影响嵌合体小鼠及敲除小鼠的产生，如果提供的ES细胞状态不好，我们有权取消注射，耽误的时间由课题组自行负责。

联系人

贺颖 email: hey@xmu.edu.cn Tel: 0592-2185817

 

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