实验动物体液采集方法

On 七月 24th, 2013, posted iin: 动物实验 by     浏览次数:870 次

一、 血液的采集

血液的采集已作专门介绍。

二、尿液的采集

实验动物的尿液常用代谢笼采集,也可通过其他装置来采集。

(一)、用代谢笼采集尿液

代谢笼用于收集实验动物自然排出的尿液,是一种特别设计的为采集实验动物各种排泄物的密封式饲养笼,有的代谢笼除可收集尿液外,又可收集粪便和动物呼出的CO2。一般简单的代谢笼主要用来收集尿液。防在代谢笼内饲养的实验动物,可通过其特殊装置收集尿液。

(二)、导尿法收集尿液

施行导尿术,较适宜于犬、猴等大动物。一般不需要麻醉,导尿时将实验动物仰卧固定,用甘油润滑导尿管。对雄性动物,操作员用一只手握住阴茎,另一只手将阴茎包皮向下,暴露龟头,使尿道口张开,将导尿管缓慢插入,导尿管推进到尿道膜部时有抵抗感,此时注意动作轻柔,继续向膀胱推进导尿管,即有尿液流出。雌性动物尿道外口在阴道前庭,导尿时于阴道前庭腹侧将导尿管插入阴道外口,其后操作同雄性动物导尿术。

用导尿法导尿可采集到没有污染的尿液。如果严格执行无菌操作,可收集到无菌尿液。

(三)输尿管插管采集尿液

一般用于要求精确计量单位时间内实验动物排尿量的实验。剖腹后,将膀胱牵拉至腹腔外,暴露膀胱底两侧的输尿管。在两侧输尿管近膀胱处用线分别结扎,于输尿管结扎处上方剪一小口,向肾脏方向分别插入充满生理盐水的插管,用线结扎固定插管,即可见尿液从插管滴出,可以收集。采尿过程中要用38℃热生理盐水纱布遮盖切口及膀胱。

(四)压迫膀胱采集尿液

实验人员用手在实验动物下腹部加压,手法既轻柔又有力。当增加的压力使实验动物膀胱括约肌松弛时,尿液会自动流出,即行收集。

(五)穿刺膀胱采集尿液

实验动物麻醉固定后,剪去下腹部耻骨联合之上,腹正中线两侧的被毛,消毒后用注射针头接注射器穿刺。取钝角进针,针头穿过皮肤后稍微改变角度,以避免穿刺后漏尿,然后刺向膀胱方向,边缓慢进针边回抽,直到抽到尿液为止。

(六)剖腹采集尿液

按上述穿刺膀胱采集尿液法做术前准备,其皮肤准备范围应更大。剖腹暴露膀胱,直视下穿刺膀胱抽取尿液。也可于穿刺前用无齿镊夹住部分膀胱壁,从镊子下方的膀胱壁进针抽尿。

(七)提鼠采集尿液

鼠类被人抓住尾巴提起即出现排尿反射,以小鼠的这种反射最明显。可以利用这一反射收集尿液。当鼠类被提起尾巴排尿后,尿滴挂在尿道外口附近的被毛上,不会马上流走,操作人员应迅速用吸管或玻璃管接住尿滴。

三、胸水和腹水的采集

(一)胸水的采集

主要采用胸腔穿刺法收集实验动物的胸水,也可处死实验动物剖开胸腔采集胸水。

1. 穿刺点定位

于实验动物腋后线第11~12肋间隙穿刺,穿刺针紧贴肋骨上缘,否则容易损伤肋间神经。也可在胸壁近胸骨左侧缘第4~5肋间隙穿刺。

2. 穿刺方法

实验动物取立位或半卧位固定,局部皮肤去毛、消毒、麻醉,穿刺针头与注射器之间接三通连接装置,实验人员以左手拇指、食指绷紧局部皮肤,右手握穿刺针紧靠肋骨下缘处垂直进针,穿刺肋间肌时产生一定阻力,当阻力消失有落空感时,说明已刺入胸膜腔,用左手固定穿刺针,打开三通连接装置,缓慢抽取胸水。

(二)腹水的采集

实验动物被固定于站立位。局部皮肤去毛、消毒、麻醉。用无菌止血钳小心提起皮肤,右手持小针头或穿刺套管针沿下腹部靠腹壁正中线处轻轻垂直刺入,注意不可刺入太深,以免损伤内脏,针头有落空感后,说明穿刺针已

四、分泌液的采集

(一)阴道分泌物的采集

适于观察阴道角质化上皮细胞。

1. 滴管冲洗法

用消毒滴管吸取少量生理盐水仔细、反复冲洗被检雌性动物阴道,将冲洗液吸出滴在载波片上晾干后染色镜检。也可直接将冲洗液置于低倍显微镜下观察,根据细胞类型变化鉴别实验动物动情周期中的不同时期。

2. 檫拭法

用生理盐水将消毒棉拭子湿润后,挤干棉拭子上的生理盐水,轻轻插入雌性动物阴道内,沿阴道内壁檫拭、转动,然后取出并作阴道涂片,进行镜检。

(二)精液的采集

1. 人工阴道套采精液法

本法适用于犬、猪、羊等大动物,采用特制的人工阴道套套在实验动物阴茎上采集精液。采精时,一手捏住阴道套,套住雄性动物的阴茎,以完全套住雄性动物的阴茎为佳,插入阴道套后,若实验动物发出低叫声,表明已经射精。此时可取下阴道套,拆下采精瓶,取出精液,迅速做有关检查。

2.阴道栓采精法

本法是将阴道栓涂片染色,镜检凝固的精液。阴道栓是雄性大、小鼠的精液和雌性阴道分泌物混合,在雌鼠阴道内凝结而成白色稍透明、圆锥形的栓状物,一般交配后2~4小时即可在雌鼠阴道口形成,并可在阴道停留12~24小时。

3.其他采精液法

用电流等物理方法刺激雄性动物的阴茎或其他性敏感区,使雄性动物被刺激发情,直至射精,用采精瓶采集射出的精液。

(三)乳汁的采集

用按摩挤奶收集乳汁的方法适合犬、猪、羊等大动物乳汁的采集。选用哺乳期的实验动物,在早上采集乳汁量最多,用手指轻轻按摩实验动物乳头,使乳汁自然流出,如乳汁不能自然流出,可张开手掌从乳房基底部朝乳头方向按摩、挤呀整个乳房,即可挤出乳汁。

五、骨髓的采集

采集骨髓一般选择胸骨、肋骨、髁骨、胫骨和股骨等造血功能活跃的骨组织。猴、犬、羊等大动物骨髓的采集用活体穿刺取骨髓的方法;大、小鼠等小动物骨头小难穿刺,只能剖杀后采胸骨、股骨的骨髓。

(一)猴、犬、羊等的骨髓采集法

1. 骨髓穿刺点定位

(1)胸骨:穿刺部位在胸骨中线,胸骨体与胸骨柄连接处,或选胸骨上1/3部。

(2)胫骨:穿刺部位在胫骨内侧,胫骨上端的下方1厘米处。

(3)肋骨:穿刺部位在第5~7肋骨各自的中点上。

(4)髁骨:穿刺部位在髁前上棘后2~3厘米的髁嵴。

(5)股骨:穿刺部位在股骨内侧面,靠下端的凹面处。

2. 骨髓穿刺方法

(1)实验动物按要求固定,穿刺部位去毛、消毒、麻醉,要求局部麻醉范围直达骨膜,也可作全麻。

(2)操作人员带消毒手套,确定穿刺点,估计从皮肤到骨髓的距离并依此固定骨髓穿刺针长度。左手拇、食指绷紧穿刺点周围皮肤,右手持穿刺针在穿刺点垂直进针,小弧度左右旋转钻入,当有落空感时表示针尖已进入骨髓腔。用左手固定穿刺针,右手抽出针芯,连接注射器缓慢抽吸骨髓组织,当注射器内抽到少许骨髓时立即停止抽吸,取出注射器将骨髓推注到载玻片上,迅速涂片数张,以备染色镜检。

(3)左手压住穿刺点周围皮肤,迅速拔出穿刺针,用棉球压迫数分钟。如穿刺的是肋骨,除压迫止血外,还需胶布封贴穿刺点,防止发生气胸。

(二)大鼠、小鼠的骨髓采集法

将实验动物剖杀、固定,解剖取出股骨或胸骨,于第三胸骨节处剪断,将其断面的骨髓挤在有稀释液的试管内或玻片上,继而涂片、染色、镜检。