进行微循环动物实验的几个原则

On 七月 24th, 2013, posted iin: 动物实验 by     浏览次数:750 次

(一)动物的麻醉

远在1944年曾有人在微循环的研究中发现:给小动物进行戊巴比妥钠注入时,剂量若超过3mg/100g体重,则不能得到预期的血管动物。也有人报导,快速注入乌拉坦能诱发血栓形成。因此,动物麻醉药物的选择和剂量,以及麻醉药的配伍都是实验中的重要环节。

微循环实验研究中几种常用动物的麻醉药配伍和剂量用法:

1.猫:35mg/kg体重戊巴比妥钠腹腔注入:70mg/kg体重氯醛糖或700mg/kg体重乌拉坦腹腔注入;75mg/kg体重α氯醛糖,静脉注射。

2.金黄地鼠:30mg/kg体重戊巴比妥钠腹腔注入(如实验时间短可25mg/kg重体)。

3.家兔:35-40mg/kg体重戊巴比妥钠腹腔注入。

4.大白鼠、小白鼠等小动物:25mg/kg体重戊巴比妥钠腹腔注入或肌注,或130mg/100g体重乌拉坦肌注。

动物处于正常麻醉状态时,角膜反射抑制,保持平稳的胸式呼吸。如出现呼吸抑制或深腹式呼吸,则说明用药过量。以上麻醉剂量可维持2~3小时较好的麻醉状态。如需继续麻醉,可追加原用药量的三分之一。

有些实验动物不需麻醉,可在动物清醒状态下进行,如兔眼球结膜微循环的检查方法等。

(二)恒温灌流

原则上,动物器官或组织的灌流液应是与该器官或组织周围体液环境的成份和pH完全一样,例如对肠系膜来说应有腹腔内液的环境,但是很难做到的。

Zweifach认为:无论应用什么灌流液,首先应使它成为胶体状态,即在灌流液中加入明胶,使之成为1%的明胶溶液。

灌流液中应该通过适量的氧和二氧化碳。灌流液的pH应以缓冲液调至中性(pH为7.35)灌流液的温度应以控制器控制在动物正常体温范围。灌流液在整个实验过程中应不停地慢速更换。常用的灌流液有林格氏液、台氏液、凯氏液、生理盐水等。灌流装置和所观察的动物应放在装有可调节的恒温实验观察箱中进行,此点在冬季显得尤为重要。将实验观察箱中的温度调节到与实验动物体表温度相近的温度,最好在25~30℃。

(三)照明装置

照明装置的温度一般不能超过动物体温。最好保持在25~30℃,否则会引起血管扩张及微血流异常。照射灯光最好不改变血液自然的色调,否则不易辨别血氧饱和程度。最理想的照明装置是纤维光束冷光源,尤其在进行肝、脾、肾等脏器的微循环观察时,没有可以伸进腹腔去的冷光源照明棒是很难进行实验的。

实验时用的照明光源,应该具备三个条件,即强、聚、“冷”。目前常用的有两种照明装置,一种是高压水银灯(220V,80W),此光源的优点是光线强,产热较少,血管与底色间反差强,缺点是血色不真实,光源触发启动慢。另一种是钨卤素灯(5~12V,40~100W),后者具有体积小巧,光线白亮,启动快的优点。钨卤素灯可用显微镜灯加以改装,因其有透镜,能调节焦距,又能达到“聚光”的目的,再在此灯前加上蓝绿色的隔热滤光片,即可控制光源温度,达到相对“冷光”的要求。此种照明光源能在普通室内保证显微镜下视野清晰,而且对观察指标影响较小。

(四)记录系统

动物微循环的瞬间变化常采用显微摄影装置来记录。选择好显微照相装置及相应的洗相设备。为了保证摄影的成功,凡是活体摄影,均需要使用拆射光源,要使用快片(24定以上的微粒胶卷)摄影,这是一个关键问题,还要增强反差(用绿色滤光片增强血管与底色间的的反差)。

照相机是一般的记录工具,它只能留下瞬间的图象,有条件最好能拍摄电影或进行彩色磁带录像。

对于管径扫描的曲线、血流流态曲线或微压力曲线要用示波器或多导记录器进行记录,如能用微处理机记录并贮存上述信号则更理想。