线栓法大鼠脑缺血模型的制备技巧

On 七月 24th, 2013, posted iin: 动物实验 by     浏览次数:1,192 次

如何提高脑缺血的成功率?

 

经常有朋友费了九牛二虎之力,做了几个大鼠MCAO模型,第二天一看,个个活蹦乱跳,毫无脑缺血症状,当场晕。不成功的主要原因是栓线插入深度不够,即栓线的前端未进入大脑前动脉(ACA),拴线的粗细倒是次要的,0.20~0.26mm均可。因此,保证栓线进入ACA并阻断对侧来的血流,而又不刺破血管是重中之重。

 

如图1尼龙线光滑的末端,不仅大大减轻了插线对血管内皮的损伤,降低了刺穿血管的可能性,而且可以更严密的阻断从大脑前动脉供应的来自对侧的血流,更为可贵的是,因为球端直径为0.32mm,插线时可以非常方便的插到位(如图2)。用240~280g的大鼠,栓塞1h即可造成稳定的脑梗死。

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图1 0.24mm直径的栓线(光镜放大40倍)

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图2 大鼠脑血管解剖示意图(红线表示栓线的插入位置)

 

(一)制备技巧

 

秘诀1:许多文献报道插入深度为18.5±0.5mm(270g左右大鼠),如果按这一标准去做,而不考虑大鼠的个体差异,后果是缺血的程度参差不齐,很多大鼠会出现症状较轻,甚至无症状。建议当插线近18mm(做上标记)时,注意手的感觉,轻缓推进,直至感觉到阻力为止(当遇到阻力后,再插线会见到线弯曲)。可能有人会说,把血管插破了也未感觉到阻力或线遇阻后的弯曲。一个原因是线太硬,另一主要原因是当栓线从血管切口插入后为防止血液从此处流出,需要结扎一条细线,这条线结扎的松紧程度很关键,应在不流血的情况下尽可能的松,这样你会发现进线时很轻松,一旦遇到阻力,就会感觉到。后者至关重要,请体会。

 

秘诀2:栓线一旦进入ACA,就要把上面提到的那根细线适度扎紧(“适度”很重要,会影响到再灌流时大鼠的生死存亡),此时的关键是动作轻柔,不要使ICA有任何的牵拉,否则栓线会脱出ACA,可能会造成缺血失败。血管外的栓线不要留得过长,更不要缝在皮外,大鼠醒来后会自己拔出。

 

(二)如何避免栓线插入翼腭A

 

大鼠仰卧时,ICA从CCA分出后下行(向背侧)约5mm又分为两支A,即走向乳突泡(Mastoid bulla)的 翼腭A和进入颅内的ICA的延伸部分。因为翼腭A的走向几乎和分支前的ICA走向相同,而ICA的延伸部分则是改向头侧走行,所以插线时会很自然的进入翼腭A,需反复拔插几次,碰巧后才能进入颅内,非常痛苦。最初我干脆将翼腭A也分离,然后夹闭或结扎翼腭A的起始部,结果是手术很难操作,效果也不理想。后来又改用另一方法,即在栓线将要插入翼腭A前,用镊子将ICA轻轻往头侧推一下,使ICA和其延长的分支成一直线,同时顺势插线,可很容易的进入颅内。随着经验值的增加,发现完全可以通过改进栓线形状达到目的,即使栓线有一定程度的弯曲,插线时只要保证栓线向屋顶方向弯曲,闭着眼睛也能将线插如颅内,决不会进入翼腭A。

 

 

 

图3 0.24mm栓线阻断大鼠MCA1h再灌注24h的TTC染色

 

附:

 

尼龙线的使用说明

 

1.实验开始前,将尼龙栓线用75%酒精擦洗干净,在距球端18.5 mm处做标记(用防水的蓝色或黑色记号笔),置0.9%的无菌生理盐水中备用。

 

2.将大鼠用10%水合氯醛生理盐水溶液麻醉(350mg/kg,ip),仰卧于手术台上。颈正中切开皮肤,依次分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA),烙断ECA的分支动脉,结扎ECA远端并烙断。

 

3.用动脉夹夹闭CCA和ICA。

 

4.在ECA 剪一小口,用注射器注入60u肝素钠生理盐水溶液0.1ml(注射时,松开ICA的动脉夹。注射后,再次夹闭)。

 

5.将尼龙栓线插入ECA,并用手术线轻轻用力结扎。

 

6.松开ICA的动脉夹, 将尼龙栓线顺势插入ICA ,插入18.5±0.5mm至大脑前动脉(ACA)起始部,阻断大脑中动脉(MCA)的血液供应。